植物
ELISA檢測試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的抗原會(huì)與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗體與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，抗原濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中指標(biāo)的濃度。
生物樣品中的通常以無活性的形式存在，在檢測指標(biāo)活性前必須進(jìn)行活化處理。
活化方法如下：
血清、血漿：280μL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液中加入40μL樣品，混勻，加入40μL活化試劑1，室溫孵育10分鐘。再加入40μL活化試劑2，混勻后立即檢測。
注意：樣品被稀釋了10倍！
細(xì)胞培養(yǎng)上清：20μL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液中加入100μL樣品，混勻，加入40μL活化試劑1，室溫孵育10分鐘。再加入40μL活化試劑2，混勻后立即檢測。
注意：樣品被稀釋了2倍！
組織勻漿：1960μL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液中加入40μL樣品，混勻后檢測。
注意：樣品被稀釋了50倍！
